大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離方法主要有這兩種

　　大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是在哺乳動(dòng)物骨髓基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞亞群，具有多種分化潛能，可分化成骨、軟骨、脂肪、神經(jīng)和成肌細(xì)胞。它們不僅機(jī)械地支持骨髓中的造血干細(xì)胞(HSC)，而且還分泌多種生長(zhǎng)因子（如IL-6、IL-11、LIF、M-CSF和SCF）來(lái)支持造血。

　　常用的MSC分離方法主要有全骨髓法和密度梯度離心法。全骨髓法是根據(jù)干細(xì)胞在低血清培養(yǎng)基中的優(yōu)勢(shì)特性，定期更換溶液去除非貼壁細(xì)胞，從而達(dá)到純化和擴(kuò)增MSC的目的。密度梯度離心是根據(jù)骨髓中各細(xì)胞成分的不同比例，分離出單核細(xì)胞進(jìn)行貼壁培養(yǎng)，兩者本質(zhì)上沒(méi)有太大區(qū)別。隨著對(duì)MSC表面抗原認(rèn)識(shí)的深入，有人采用免疫方法，如流式細(xì)胞儀、免疫磁珠等。然而，流式或磁珠分選細(xì)胞增殖緩慢等問(wèn)題，加上成本高、技術(shù)難度大等問(wèn)題，在一定程度上限制了這些方法的廣泛應(yīng)用。

 

　　大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)必須保持工作區(qū)域無(wú)菌和清潔。先用紫外線燈和臭氧消毒1h，然后通風(fēng)30min。操作前需更換細(xì)胞間專用拖鞋，戴上一次性橡膠手套并用75%乙醇消毒，戴上實(shí)驗(yàn)服，戴上一次性口罩和帽子，操作時(shí)不要大聲說(shuō)話，整個(gè)無(wú)菌操作應(yīng)在酒精燈周圍進(jìn)行。

　　在大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的原代培養(yǎng)過(guò)程中，可在約24小時(shí)內(nèi)發(fā)生貼壁生長(zhǎng)。細(xì)胞呈圓形、梭形和三角形，生長(zhǎng)緩慢。液體交換后細(xì)胞增殖明顯，呈梭形為主，形態(tài)多樣。70%-80%可在10-14天融合，達(dá)到通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)。傳代細(xì)胞形狀單一，有紡錘形或扁平形，增殖至細(xì)胞融合時(shí)呈渦旋狀和放射狀排列。