293T（人胚腎細(xì)胞）都有哪些應(yīng)用？

　　293T（人胚腎細(xì)胞）來(lái)源于以腺病毒5DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞，適于滴定人腺病毒。細(xì)胞表達(dá)一種不尋常的由整聯(lián)蛋白beta-1亞基和玻聯(lián)蛋白alpha-v亞基組成的玻聯(lián)蛋白細(xì)胞表面受體。Ad5插入片段進(jìn)行了克隆和測(cè)序，結(jié)果表明堿基1-4344插入到了19號(hào)染色體（19q13.2）。293細(xì)胞比較容易轉(zhuǎn)染，是一個(gè)很常用的表達(dá)研究外源基因的細(xì)胞株。293細(xì)胞的缺陷是生長(zhǎng)過(guò)程中貼壁強(qiáng)度比較小。所以在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中容易流失，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

　　

　　293T（人胚腎細(xì)胞）用于納米Fe3O4/Cr（Ⅵ）復(fù)合物對(duì)大腸桿菌及人胚腎細(xì)胞的毒性研究。

　　

　　以Cr（Ⅵ）為典型重金屬污染物的代表，利用納米四氧化三鐵吸附水中Cr（Ⅵ）,選擇大腸桿菌E.coli和人胚腎細(xì)胞HEK293兩種不同層級(jí)的生物作為模型,研究磁性納米四氧化三鐵吸附Cr（Ⅵ）離子后的復(fù)合物對(duì)兩種生物產(chǎn)生的毒性效應(yīng)。本研究的濃度作用范圍如下:MNPs濃度為250μg/mL,Cr（Ⅵ）濃度分別為1、2、3μg/mL,MNPs吸附不同濃度Cr（Ⅵ）后的MNPs/Cr（Ⅵ）復(fù)合物,作用時(shí)間為24h。

　　

　　結(jié)果如下:1、本研究采用共沉淀法,合成了納米四氧化三鐵顆粒（MNPs）,并利用MNPs吸附水中的Cr（Ⅵ）,制備了MNPs/Cr（Ⅵ）復(fù)合物。研究發(fā)現(xiàn),MNPs能夠有效的吸附水中的Cr（Ⅵ）離子;MNPs對(duì)Cr（Ⅵ）的吸附符合Langmuir模型。MNPs/Cr（Ⅵ）復(fù)合物呈球形,顆粒大小一致,分布均勻,單分散性好,性質(zhì)比較穩(wěn)定。

　　

　　2、在本研究的濃度范圍和作用時(shí)間下,Cr（Ⅵ）對(duì)大腸桿菌E.coli具有明顯的毒性效應(yīng),并且與Cr（Ⅵ）濃度呈劑量相關(guān)性。在Cr（Ⅵ）離子的作用下,E.coli的生長(zhǎng)受到明顯的抑制,Cr（Ⅵ）能夠引起E.coli內(nèi)活性氧顯著升高,并導(dǎo)致氧化損傷,使細(xì)胞結(jié)構(gòu)嚴(yán)重受損。MNPs及MNPs/Cr（Ⅵ）復(fù)合物對(duì)E.coli沒(méi)有顯著的毒性效應(yīng)。與空白組比較,生長(zhǎng)曲線沒(méi)有出現(xiàn)明顯的變化,在MNPs、MNPs/Cr（Ⅵ）復(fù)合物作用下,E.coli內(nèi)活性氧略微升高,但并未導(dǎo)致明顯的氧化損傷。通過(guò)透射電鏡觀察到僅有少量的MNPs、MNPs/Cr（Ⅵ）復(fù)合物吸附在大腸桿菌的表面,但細(xì)胞膜的通透性及細(xì)胞結(jié)構(gòu)沒(méi)有發(fā)生明顯變化。MNPs/Cr（Ⅵ）復(fù)合物在LB培養(yǎng)基中都是帶負(fù)電的顆粒,且水合粒徑都在200nm左右,導(dǎo)致MNPs/Cr（Ⅵ）復(fù)合物沒(méi)有進(jìn)入到大腸桿菌細(xì)胞內(nèi),僅有少量的MNPs/Cr（Ⅵ）復(fù)合物吸附在大腸桿菌表面,盡管產(chǎn)生了少量的活性氧,但不足以導(dǎo)致細(xì)胞代謝失衡。因此,MNPs及MNPs/Cr（Ⅵ）復(fù)合物對(duì)E.coli沒(méi)有產(chǎn)生明顯的毒性效應(yīng)。

　　

　　3、在本研究的濃度范圍和作用時(shí)間下,Cr（Ⅵ）對(duì)293T（人胚腎細(xì)胞）HEK293的毒性效應(yīng)顯著,并且與Cr（Ⅵ）濃度劑量相關(guān)。在Cr（Ⅵ）離子的作用下,細(xì)胞的形態(tài)和密度都發(fā)生了顯著變化,細(xì)胞活力明顯下降,同時(shí)引起細(xì)胞內(nèi)活性氧顯著升高,導(dǎo)致氧化損傷,并誘導(dǎo)了細(xì)胞的凋亡。在MNPs、MNPs/Cr（Ⅵ）復(fù)合物的作用下,與空白組相比,細(xì)胞的形態(tài)、密度和細(xì)胞活力均沒(méi)有出現(xiàn)明顯的變化。

　　

　　MNPs吸附Cr（Ⅵ）后,顯著降低了Cr（Ⅵ）對(duì)HEK293細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生的破壞作用,MNPs/Cr（Ⅵ）復(fù)合物沒(méi)有引發(fā)細(xì)胞的氧化損傷,證實(shí)了細(xì)胞膜和細(xì)胞結(jié)構(gòu)沒(méi)有受到明顯的破壞。在DMEM培養(yǎng)基中,由于MNPs/Cr（Ⅵ）復(fù)合物的水合粒徑基本都在200～400nm之間,且表面電荷都是帶負(fù)電,導(dǎo)致絕大多數(shù)的復(fù)合物不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),MNPs/Cr（Ⅵ）復(fù)合物在HEK293細(xì)胞內(nèi)的攝取量極小,這些顆粒是從細(xì)胞外通過(guò)質(zhì)膜內(nèi)陷形成囊泡進(jìn)入細(xì)胞,但沒(méi)有進(jìn)入到細(xì)胞核中,在正常代謝途徑下不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的凋亡。因此,MNPs及MNPs/Cr（Ⅵ）復(fù)合物對(duì)HEK293細(xì)胞沒(méi)有顯著毒性效應(yīng)。