A549 （人非小細胞肺癌細胞）細胞培養(yǎng)常用設施和設備

　　A549 （人非小細胞肺癌細胞）細胞培養(yǎng)的常用設施設備：實驗室設計：細胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術，要求工作環(huán)境和條件必須不受微生物污染和其他有害因素影響。細胞培養(yǎng)室的設計原則是防止微生物污染和有害因素，工作環(huán)境要清潔，空氣要新鮮、干燥、無煙、無塵。細胞培養(yǎng)室的設計原則一般是：無菌操作區(qū)位于房間的內側，活動較少，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)在一個房間，而洗滌和消毒在另一個房間。
 

　　

　　A549 （人非小細胞肺癌細胞）細胞培養(yǎng)常用設施和設備。

　　

　　1、超凈工作臺：又稱凈化工作臺，分為側流式、直流式和外流式三類。

　　

　　2、無菌操作間：一般由換藥室、緩沖室和操作室組成。操作室配有凈化工作臺、二氧化碳培養(yǎng)箱、離心機、倒置顯微鏡等。緩沖室可放置冰箱、冷藏箱、HAO消毒用的無菌物品等。

　　

　　3、操作室：普通孵化器、離心機、水浴鍋、計時鐘、普通天平及日常分析處理材料。

　　

　　4、清洗消毒室：烤箱、消毒鍋、蒸餾水處理器、酸罐等。

　　

　　5、分析室：顯微鏡、電腦、打印機等。

　　

　　A549 （人非小細胞肺癌細胞）細胞低溫保存的注意事項：細胞低溫保存液要提前準備好，DMSO不能直接加入細胞懸液中；不同細胞的消化時間不同。以實際顯微鏡檢查結果為準。當大部分細胞回縮變圓，少數(shù)細胞脫落時，可停止消化。消化時間不宜過長；應選擇80%-90%左右的匯合度。細胞應在對數(shù)生長期時進行冷凍，以確保細胞在冷凍過程中處于良好狀態(tài)。冷凍密度可根據(jù)細胞性質進行調整；冷凍細胞的儲存溫度應低于-130℃，不宜長期保持在-80℃。粘附細胞冷凍保存的操作步驟如下。從培養(yǎng)箱中取出待凍細胞；在顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)并拍照；將酒精消毒后的培養(yǎng)瓶放入安全柜中；吸去多余的培養(yǎng)基，加入2~3ml（PBS緩沖液）濕潤一次；加入1ml胰蛋白酶，在37℃下消化；消化約1分鐘，在顯微鏡下觀察細胞消化情況；消化完畢后，加入3ml*培養(yǎng)基，終止。將細胞懸液轉入15ml離心管進行離心，以1000rpm/min（約200g）離心3-5min；吸去多余液體，向細胞沉淀物中加入適量冷凍液，輕輕吸打混合；按比例分別裝入冷凍管；將HAO標簽放入梯度冷凍箱；將冷凍箱放入-80℃，冷卻一晚，然后移入液氮保存。貼壁細胞低溫保存實驗的準備工作：將15mL離心管、低溫保存管、PBS緩沖液、移液器、電動移液器等物品提前放入生物安全柜，并經(jīng)紫外線照射消毒30min；取出完整的細胞培養(yǎng)液、0。25%胰蛋白酶-0.02%EDTA、細胞凍存液等從4℃冰箱中取出，復溫至室溫備用；程序冷卻箱復溫至室溫備用。