細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇

一、程序凍存步驟（需梯度降溫）1、配置凍存液，凍存液推薦配比：55%（基礎(chǔ)培養(yǎng)基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；推薦使用Procell通用血清型程序凍存液，貨號(hào)PB180436；2、制備好的細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)，計(jì)算總細(xì)胞量；3、細(xì)胞離心后盡量吸干凈上清，離心轉(zhuǎn)速1200rpm（250g）3min；4、加入配置好的凍存液重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度為3×106~1×107cells/mL；5、分裝入凍存管，一個(gè)凍存管分裝1~1.5毫升；6、推薦使用程序降溫...

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原代細(xì)胞的取材和分離方法

將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出，經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機(jī)械方法處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖，這一過(guò)程稱原代培養(yǎng)。原代細(xì)胞培養(yǎng)的步驟一般是：取材→分離→培養(yǎng)和維持，今天我們重點(diǎn)介紹原代細(xì)胞的取材和分離方法。一、取材人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。取材的基本要求：①取材要注意新鮮和保鮮②應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌③防止機(jī)械損傷④去除無(wú)用組織和避免干燥⑤應(yīng)注意組織類(lèi)型、分化程度、年齡等⑥作...

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原代細(xì)胞的復(fù)蘇步驟

細(xì)胞一般儲(chǔ)存在液氮中,溫度達(dá)196°C,理論上儲(chǔ)存時(shí)間是無(wú)限的。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實(shí)驗(yàn)證明這樣可以zuida限度的保存細(xì)胞活力。細(xì)胞復(fù)蘇就是要把原本冷凍保存(凍存)著的細(xì)胞恢復(fù)到一般的生長(zhǎng)狀態(tài),今天我們來(lái)看看原代細(xì)胞的復(fù)蘇步驟。一、檢查收到細(xì)胞株包裹時(shí),請(qǐng)檢查細(xì)胞株冷凍管是否有解凍情形,若有請(qǐng)立即處理告訴寄方。細(xì)胞株請(qǐng)盡速開(kāi)始培養(yǎng),或立即冷凍保存(置于-70。C,隔夜后,移到iqN2)。二、冷凍細(xì)胞解凍1、依據(jù)細(xì)胞株說(shuō)明書(shū)zhiding的基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類(lèi)、血清...

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原代細(xì)胞傳代方法哪有幾種?

原代細(xì)胞是指從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞,稱為原代細(xì)胞。-般認(rèn)為,培養(yǎng)的原代的第1代細(xì)胞和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。在人工條件下使其原代細(xì)胞生存、生長(zhǎng)、繁殖和傳代,進(jìn)行細(xì)胞生命過(guò)程、細(xì)胞癌變、細(xì)胞I程等問(wèn)題的研究。那么關(guān)于原代細(xì)胞的傳代培養(yǎng),我們應(yīng)該怎么做呢?一般有以下兩種方法:一、貼壁細(xì)胞的消化法傳代1、吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或與ED...

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